科學家們在深入探究疾病的發生機制過程中，動物模型的建立起到了至關重要的作用。通過對動物模型進行疾病模擬或基因突變，可以模擬人類疾病的發病過程，從而揭示疾病的病理生理機制、分子機制和遺傳機制。同時，動物模型也可以用于評估潛在藥物的療效和安全性，為新藥的研發提供重要參考。通過對動物模型進行藥物治療試驗，可以評估藥物對疾病的治療效果、劑量效應、藥物代謝和毒性反應等，為臨床前藥物篩選和開發提供重要參考依據。

通過慢病毒介導的基因傳遞，可以構建具有特定基因型的動物模型，如基因敲除、過表達或突變等，也可以構建疾病模型，模擬人類疾病的發生和發展過程，用于疾病機制研究和藥物篩選。慢病毒載體在動物疾病模型構建中有多種應用場景，今天就來和小編一起探索一下慢病毒的體內應用吧。

一、瘤內注射

?文章標題：METTL3-Mediated LINC00475 AlternativeSplicing Promotes Glioma Progression byInducing Mitochondrial Fission
?發表期刊：Research (Washington, D.C.)
?作者單位：廣州醫科大學

線粒體分裂促進膠質瘤的進展，但lncRNAs在線粒體分裂中的功能和調控機制尚不清楚。本文中，作者發現與正常腦組織相比，LINC00475被證實在神經膠質瘤中過度表達，并且發生可變剪接的頻率更高，預后更差。體外和動物腫瘤形成實驗表明，LINC00475-S對膠質瘤細胞的增殖、轉移、自噬和線粒體分裂的影響明顯強于LINC00475。從機制上講，METTL3 通過m6A修飾通過剪接LINC00475誘導LINC00475-S的產生，隨后通過抑制MIF的表達促進神經膠質瘤細胞的線粒體分裂。Pull-down聯合LC/MS和RIP發現m6A識別蛋白HNRNPH1結合LINC00475的GYR和GY結構域并促進LINC00475剪接。METTL3以m6A 依賴性方式促進HNRNPH1與LINC00475結合，從而誘導 LINC00475-S的產生。METTL3 促進HNRNPH1介導的LINC00475的可變剪接，通過誘導線粒體分裂促進膠質瘤進展。靶向LINC00475的可變剪接和m6A編輯可以作為對抗神經膠質瘤的治療策略。

圖1. 過表達LINC00475-S時，U251致瘤潛力增強

☆ 作者利用慢病毒載體，通過瘤內注射（5.0E+06 TU/只，2周1次）在腫瘤組織中過表達LINC00475和LINC00475-S。

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二、氣管內注射

?文章標題：A novel protein RASON encoded by a lncRNA controls  oncogenic RAS signaling in KRAS mutant cancers
?發表期刊：Cell Research
?作者單位：南京大學

LSL-KrasG12D; Trp53R172H/+ (KP小鼠)肺癌模型是一種通常用于研究Kras驅動的腫瘤發生的遺傳小鼠模型。KrasG12D是人類腫瘤中常見的Kras基因的活化突變體，Trp53R172H是p53基因的突變體。分別在這兩個基因編碼區和啟動子之間插入loxp-Stop-loxp終止序列，這兩個基因在沒有Cre重組酶的條件下不表達突變蛋白；當與組織特異性表達的Cre交配后，可導致轉錄終止序列loxp-Stop-loxp缺失進而表達致癌蛋白。

本文中，作者通過氣管內注射含有Cre、Cas9和Rason sgRNA的慢病毒構建體，同時實現了Rason的敲除和肺中Kras/p53等位基因的激活。通過mircoCT對肺部腫瘤的發生率及腫瘤大小進行監測，結果顯示Rason敲除顯著抑制KP小鼠肺部腫瘤的形成，并顯著延長小鼠的存活期。以上結果提示了Kras突變腫瘤中Rason促腫瘤功能的共同機制。

圖2. Rason敲除顯著抑制KP小鼠肺部腫瘤的形成

☆ 作者利用含有Cre、Cas9和Rason sgRNA的慢病毒載體，通過氣管內注射（1.0E+05 TU/只）同時實現Rason的敲除和肺中Kras/p53等位基因的激活。

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三、鞘內注射

?文章標題：Activation of GDNF-ERK-Runx1 signaling contributes to P2X3R gene transcription and bone cancer pain
?發表期刊：iScience
?作者單位：北京大學

骨癌疼痛是骨轉移癌癥患者的常見癥狀，其潛在機制尚不清楚。本文中作者報道了 Runx1直接上調PC12細胞中P2X3受體（P2X3R）基因啟動子的轉錄活性。敲低背根神經節（DRG）神經元中的Runx1抑制P2X3R的功能性上調，減弱荷瘤大鼠的神經元過度興奮和疼痛超敏反應；而過表達Runx1促進DRG神經元中的P2X3R基因轉錄，誘導了naive大鼠的神經元過度興奮和疼痛超敏反應。GDNF-GFRα1-Ret-ERK信號轉導的激活是DRG神經元中Runx1介導的P2X3R基因轉錄所必需的，并有助于荷瘤大鼠的神經元過度興奮和疼痛超敏反應。這些發現表明，由GDNF-GFRα1-Ret-ERK信號激活引起的Runx1介導的P2X3R基因轉錄有助于DRG神經元的致敏和骨癌疼痛的發病機制。作者的研究結果確定了一種潛在的靶向機制，可能導致癌癥患者的骨轉移相關疼痛。

圖3. 過表達DRG神經元中的Runx1，促進P2X3R基因轉錄和蛋白表達

☆ 作者利用慢病毒載體，通過鞘內注射（5.0 E+08 TU/mL，20 ul）在DRG神經元中過表達Runx1，并在病毒注射后14天獲得DRG組織。

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四、玻璃體腔注射

?文章標題：ALKBH5-Mediated m6A Modification of A20 Regulates Microglia Polarization in Diabetic Retinopathy
?發表期刊：Frontiers in Immunology
?作者單位：中山大學

本文中，作者發現糖尿病大鼠的視網膜小膠質細胞M1極化率較高，M2極化率較低。隨著葡萄糖濃度的增加，小膠質細胞傾向于極化為M1型。通過RNA測序顯示，葡萄糖處理的小膠質細胞顯示出差異表達的基因譜，該譜富集在各種炎癥類別和通路中。葡萄糖處理后小膠質細胞中A20表達較低，證明其負向調節M1極化。此外，玻璃體腔注射A20過表達慢病毒（OE-A20）糾正了糖尿病大鼠增強的M1視網膜小膠質細胞極化。在葡萄糖處理的小膠質細胞中m6A去甲基化酶ALKBH5介導增加m6A修飾及加速A20降解。本研究不僅為糖尿病視網膜病變的發病機制提供了新的視角，而且為糖尿病視網膜病變的診斷和治療提供了新的視角。

圖4. 玻璃體腔注射A20過表達慢病毒可糾正糖尿病大鼠視網膜小膠質細胞增強的M1極化

☆ 作者利用慢病毒載體，通過玻璃體腔注射(1.0E+09 TU,10 ul)在眼內過表達A20。

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五、腹股溝淋巴結注射

?文章標題：Fibroblastic reticular cells in lymph node potentiate white adipose tissue beiging through neuro-immune crosstalk in male mice
?發表期刊：Nature Communications
?作者單位：香港大學

淋巴結（LN）通常嵌在代謝活躍的白色脂肪組織（WAT）中，而它們的功能關系仍然模糊不清，本文中，作者發現腹股溝 LN（iLN）中的成纖維細胞網狀細胞（FRC）皮下 脂肪組織（scWAT）寒冷誘導的米色化反應和產熱IL-33的主要來源。從機制上講，冷增強的交感神經流出到iLN激活FRC中的β1和β2腎上腺素能受體（AR）信號傳導，以促進IL-33釋放到iLN周圍的scWAT中。其中IL-33激活2型免疫反應以增強米色脂肪細胞的生物發生。通過選擇性消融 FRC中的IL-33或β1和β2-AR或iLN的交感神經去神經支配來消除冷誘導的scWAT 米色化反應，而IL-33的補充可逆轉iLN缺陷小鼠中受損的冷誘導的米色化反應。綜上所述，本研究揭示了iLN中FRC在介導神經免疫相互作用以維持能量穩態方面的意想不到的作用。

圖5. 腹股溝淋巴結內注射慢病毒特異性敲除FRC中的IL-33

☆ 作者利用慢病毒載體，在IL-33fl/fl小鼠腹股溝淋巴結內注射（7.5E+06 TU/只）含有特異性啟動子Ccl19和Cre的慢病毒，實現iLN中FRC 細胞IL-33的特異性敲除。

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六、活體成像

?文章標題：Hypoxia-induced circRNF13 promotes the progression and glycolysis of pancreatic cancer
?發表期刊：Experimental & Molecular Medicine
?作者單位：上海交通大學

胰腺癌（PC）是最惡性的腫瘤之一。快速進展和遠處轉移是患者死亡的主要原因。缺氧是多種癌癥的標志，與腫瘤生物學有關。然而，關于circRNA在糖酵解和缺氧介導的PC進展中的作用知之甚少。在這里，作者使用RNA測序分析了缺氧相關circRNA的表達情況，發現了一種稱為circRNF13的獨tecircRNA在PC組織中上調，這可能是一個潛在的預后指標。HIF-1α和EIF4A3參與調節circRNF13的生物發生。此外，circRNF13被驗證對細胞增殖、血管生成、侵襲和糖酵解具有刺激作用。重要的是，作者發現circRNF13 通過充當miR-654-3p海綿來提高PDK3水平，從而促進PC惡性過程。以上研究結果表明，由HIF-1α和EIF4A3介導的缺氧誘導的circRNF13促進了PC的腫瘤進展和糖酵解，表明circRNF13作為PC的預后生物標志物和治療靶點的潛力。

圖6. circRNF13可能作為致癌基因促進胰腺癌的轉移

☆ 作者通過尾靜脈分別注射經慢病毒構建的過表達circRNF13序列和Luciferase編碼序列以及干擾circRNF13序列和Luciferase編碼序列的人胰腺癌細胞，每2周進行一次生物發光體內成像檢測，觀察體內腫瘤細胞的轉移情況。

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