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當(dāng)前位置:首頁(yè) > 產(chǎn)品中心 > PCR&q-PCR > PCR > AN11L818/AN11L8192 x Taq PCR Master Mix

2 x Taq PCR Master Mix

簡(jiǎn)要描述:2 x Taq PCR Master Mix 是PCR 反應(yīng)預(yù)混液,其中包含Taq DNA Polymerase、dNTPs、反應(yīng)緩沖液、loading Dye 等成分,使用時(shí)只需取適量本產(chǎn)品,加入模板和引物

  • 產(chǎn)品型號(hào):AN11L818/AN11L819
  • 廠商性質(zhì):生產(chǎn)廠家
  • 更新時(shí)間:2024-09-06
  • 訪  問  量:2895

詳細(xì)介紹

品牌其他品牌貨號(hào)AN11L818/AN11L819
規(guī)格2 * 1mL供貨周期現(xiàn)貨
主要用途主要用于基因組 DNA 靶序列和 RNA 反轉(zhuǎn)錄后 cDNA 靶序列的定性檢測(cè)。應(yīng)用領(lǐng)域生物產(chǎn)業(yè)

產(chǎn)品描述

2 x Taq PCR Master Mix 是PCR 反應(yīng)預(yù)混液,其中包含Taq DNA Polymerase、dNTPs、反應(yīng)緩沖液、loading Dye 等成分,使用時(shí)只需取適量本產(chǎn)品,加入模板和引物,并加入 ddH2O 補(bǔ)足體積,使反應(yīng)體系濃度為 1× 即可進(jìn)行 PCR 反應(yīng)。本產(chǎn)品最長(zhǎng)可擴(kuò)增 5kb DNA片段,具有良好的擴(kuò)增特異性和模板兼容性, PCR 產(chǎn)物 3' 端帶突出 A 堿基,純化后可直接用于 T/A 克隆。

本產(chǎn)品中包含兩種染料,PCR反應(yīng)完成后無需額外添加 loading buffer,可以直接進(jìn)行電泳,且電泳過程中會(huì)出現(xiàn)兩個(gè)指示條帶。該染料不影響 PCR 擴(kuò)增效率,但對(duì)于需要對(duì) PCR 產(chǎn)物進(jìn)行吸光度、熒光等光學(xué)分析的實(shí)驗(yàn),建議在分析前對(duì) PCR 產(chǎn)物進(jìn)行純化,或使用無染料的PCR預(yù)混液。

訂購(gòu)信息

產(chǎn)品名稱

貨號(hào)

規(guī)格

2 x Taq PCR Master Mix

AN11L818

2*1mL

2 x Taq PCR Master Mix

AN11L819

5*1mL

運(yùn)輸與保存

藍(lán)冰運(yùn)輸。-20℃保存,有效期24個(gè)月。

使用方法

1.    常規(guī) PCR 反應(yīng)體系


組分

20 μL體系

50 μL體系

終濃度

2 x Taq PCR Master Mix

10 μL

25 μL

1 x

正向引物(10 μM)(1)

0.4-0.8 μL

1-2 μL

0.2-0.4 μM

反向引物(10 μM)(1)

0.4-0.8 μL

1-4 μL

0.2-0.4 μM

DNA 模板(2)

X μL

X μL

-

ddH2O

To 20 μL

To 50 μL

-



(1) 引物推薦終濃度為 0.2~0.4 μM,效果不佳時(shí)可以在 0.1~1 μM 濃度范圍內(nèi)進(jìn)行調(diào)整; 

(2)  不同模板最佳反應(yīng)濃度有所不同,以 50 μL 體系為例:模板為基因組 DNA 時(shí),一般推薦的使用量為 10~400 ng;當(dāng)模板為質(zhì)粒或病毒 DNA 時(shí),一般推薦的使用量為 10 pg~20 ng。

2.    常規(guī) PCR 反應(yīng)程序

步驟

溫度

時(shí)間

預(yù)變性(1)

94℃

3~5 min

變性

94℃

15 sec

退火

53~65℃

15 sec

延伸(2)

72℃

30~60 sec/kb


30~35 Cycles

終延伸

72℃

5min

(1)  該預(yù)變性條件適合絕大多數(shù)擴(kuò)增反應(yīng), 對(duì)于一些復(fù)雜模板, 例如:菌液、菌落(尤 其是酵母)的PCR 擴(kuò)增,預(yù)變性時(shí)間可適當(dāng)延長(zhǎng)至 10 min,以提高預(yù)變性效果;

(2)  關(guān)于延伸速率,當(dāng)目的片段長(zhǎng)度不超過 2 kb 時(shí),推薦使用 30 sec/ kb;當(dāng)目的片段長(zhǎng)度大于 2 kb 時(shí),推薦使用 60 sec/kb。延伸速率與模板復(fù)雜程度有關(guān),如遇產(chǎn)率較低可適當(dāng)提高延伸時(shí)間。

注:如果使用酵母菌液作為PCR 擴(kuò)增模板,建議目的片段長(zhǎng)度不超過2.5kb, 若超出2.5kb, 建議將酵母菌液預(yù)先進(jìn)行破壁處理。

3.    凝膠濃度對(duì)應(yīng)的染料遷移距離

瓊脂糖凝膠濃度

金色條帶

藍(lán)色條帶

0.8%

~80 bp

4000 bp

1.0%

~40 bp

2000 bp

1.5%

~20 bp

1500 bp

2.0%

<10 bp

1200 bp

2.5%

<10 bp

1200 bp

3.0%

<10 bp

1200 bp

注:染料會(huì)影響吸光度。

注意事項(xiàng)

1.     本產(chǎn)品僅限于科學(xué)實(shí)驗(yàn)研究使用,不得用于臨床診斷、治療等領(lǐng)域。

2.     本產(chǎn)品在短期 -20℃ 儲(chǔ)存時(shí)不會(huì)凝固,可以隨取隨用,如遇儲(chǔ)存溫度波動(dòng),體系結(jié)冰為正常現(xiàn)象不影響使用。

3.     建議將所有的反應(yīng)組分在冰上配制,最后加入2 x Taq PCR Master Mix

4.     使用基因組模板進(jìn)行較長(zhǎng)片段擴(kuò)增需要使用高質(zhì)量純化的DNA模板,可以提高 PCR 成功率。

5.     本產(chǎn)品擴(kuò)增產(chǎn)物可用于 T/A 克隆。由于本產(chǎn)品含有 Loading Dye,PCR 產(chǎn)物需經(jīng)過切膠回收后才可充分去除 Loading Dye。

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本產(chǎn)品僅限于科學(xué)實(shí)驗(yàn)研究使用,不得用于臨床診斷、治療等領(lǐng)域。


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