產(chǎn)品描述
本試劑盒創(chuàng)新性地采用過(guò)柱純化的方法，能夠快速、溫和、高效地裂解動(dòng)物組織或細(xì)胞，有效提取總蛋白，包括離心管柱和經(jīng)過(guò)優(yōu)化的細(xì)胞裂解液。與傳統(tǒng)的 RIPA 裂解液相比，本試劑盒可以提取出更多的蛋白，避免在細(xì)胞裂解過(guò)程中由于 DNA 沉淀和不溶性細(xì)胞碎片導(dǎo)致的部分蛋白丟失。采用過(guò)柱純化技術(shù)，最小可處理 20 μL 樣本與裂解液混合物，最大可達(dá) 500 μL。提供變性和非變性兩種細(xì)胞裂解液，用戶可根據(jù)后續(xù)的實(shí)驗(yàn)需求選取不同的裂解液。【注】：變性裂解液可用于 SDS-PAGE，Western-blotting， ELISA 分析；非變性裂解液可用于 IP，Co-IP，enzymeassays 等分析。
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產(chǎn)品組分

運(yùn)輸與保存
常溫運(yùn)輸。常溫保存，有效期12個(gè)月。【注】：研磨棒可重復(fù)使用。
使用方法
細(xì)胞樣品
一、 樣品裂解
變性液提取
1. 去除細(xì)胞培養(yǎng)液，用預(yù)冷的PBS 洗滌兩次。按照6孔板每孔加入150-200uL 的裂解液的比例均勻加入裂解液，如果
細(xì)胞密度過(guò)高可增加裂解液的量至250-300uL。【注】：裂解液過(guò)少會(huì)使細(xì)胞裂解不充分，影響蛋白提取的質(zhì)量。
2. 用槍吹打數(shù)下，轉(zhuǎn)移裂解液至離心管柱中。【注】：少量沒(méi)有裂解的細(xì)胞不影響最終蛋白提取的質(zhì)量。
3. 14,000 rpm 離心1 min。
4. 收集離心管底的裂解液即為細(xì)胞全蛋白提取液。【注】：細(xì)胞裂解液中不含蛋白酶抑制劑，需要用戶加入蛋白酶抑
制劑防止蛋白降解。
非變性液提取
1. 去除細(xì)胞培養(yǎng)液，用預(yù)冷的 PBS 洗滌兩次。按照6孔板每孔加入150-200uL 的裂解液的比例均勻加入裂解液，如果
細(xì)胞密度過(guò)高可增加裂解液的量至250-300uL。【注】：裂解液過(guò)少會(huì)使細(xì)胞裂解不充分，影響蛋白提取的質(zhì)量。
2. 用槍吹打數(shù)下，冰上放置10min后轉(zhuǎn)移裂解液至離心管柱中。
3. 14,000 rpm 離心1 min。
4. 收集離心管底的裂解液即為細(xì)胞全蛋白提取液。【注】：細(xì)胞裂解液中不含蛋白酶抑制劑，需要用戶加入蛋白酶抑
制劑防止蛋白降解。
二、懸浮細(xì)胞
變性液提取
1. 收集細(xì)胞0.5~2×107
于1.5mL離心管中，1mL預(yù)冷的PBS洗滌兩次，1,000xg 離心3min，棄上清，重復(fù)三次。
2. 根據(jù)細(xì)胞沉淀體積加入同體積的預(yù)冷PBS重懸細(xì)胞后，根據(jù)細(xì)胞量加入對(duì)應(yīng)量的變性裂解液。【注】：表中為推薦
用量；PBS不可多加，只要能使細(xì)胞重懸即可。

3. 劇烈震蕩15s后，轉(zhuǎn)移裂解液于離心管柱中。【注】：少量沒(méi)有裂解的細(xì)胞不影響最終蛋白提取的質(zhì)量。
4. 14,000 rpm 離心1min（如果裂解液過(guò)于粘稠可增加離心時(shí)間）。
5. 收集離心管底的裂解液即為細(xì)胞全蛋白提取液。【注】：細(xì)胞裂解液中不含蛋白酶抑制劑，需要用戶加入蛋白酶抑
制劑防止蛋白降解。
非變性液提取
1. 收集細(xì)胞0.5~2×107
于1.5mL離心管中，1mL預(yù)冷的PBS洗滌兩次，1,000xg 離心3min，棄上清，重復(fù)三次。
2. 根據(jù)細(xì)胞量加入對(duì)應(yīng)量的非變性裂解液。【注】：表中為推薦用量。
細(xì)胞沉淀體積（uL） 加入裂解液體積（uL）

3. 劇烈震蕩15s后，冰上孵育10min。
4. 轉(zhuǎn)移裂解液于離心管柱中。
5. 14,000 rpm 離心1min
6. 收集離心管底的裂解液即為細(xì)胞全蛋白提取液。【注】：細(xì)胞裂解液中不含蛋白酶抑制劑，需要用戶加入蛋白酶抑
制劑防止蛋白降解。
3、組織樣品
變性液提取
1. 把組織jian切成小碎片。
2. 加入適當(dāng)裂解液，一般100mg 組織加入1mL 裂解液。【注】：如果裂解不充分可適當(dāng)增加裂解液。
3. 用研磨棒在1.5mL離心管中研磨組織或者用玻璃勻漿器，直至充分裂解。【注】：如果是心肌，皮膚等不易研磨的
組織應(yīng)使用勻漿器勻漿。
4. 轉(zhuǎn)移裂解液于離心管柱中。
5. 14,000 rmp 離心1min（如果裂解液過(guò)于粘稠可增加離心時(shí)間）。
6. 收集離心管底的裂解液即為全蛋白提取液。【注】：如果組織樣品非常小，可剪切后直接加入裂解液并劇烈vortex
裂解。
非變性液提取
1. 組織jian切成小碎片。
2. 加入適當(dāng)裂解液，一般100mg 組織加入1ml 裂解液。【注】：如果裂解不充分可適當(dāng)增加裂解液。
3. 用研磨棒研磨組織勻漿器勻漿，直至充分裂解。冰上放置10min。【注】：如果是心肌，皮膚等不易研磨的組織應(yīng)
使用勻漿器勻漿。
4. 轉(zhuǎn)移裂解液于離心管柱中。
5. 14,000 rmp 離心1min。
6. 收集離心管底的裂解液即為全蛋白提取液。【注】：如果組織樣品非常小，可剪切后直接加入裂解液并劇烈vortex
裂解。
注意事項(xiàng)
1. 本產(chǎn)品僅限于科學(xué)實(shí)驗(yàn)研究使用，不得用于臨床診斷、治療等領(lǐng)域。
2. 本產(chǎn)品不含蛋白酶抑制劑，使用中應(yīng)加入 蛋白酶抑制劑混合物(100×, 不含EDTA)(貨號(hào): AP02L084) 防止蛋白降解。
3. 本產(chǎn)品不兼容Bradford法測(cè)蛋白濃度，請(qǐng)使用 BCA蛋白定量試劑盒（貨號(hào)： AP12L025）。